利用構(gòu)建的高選擇型基因工程菌生物富集模擬電解廢水中的汞離子。模擬電解廢水中除含有3。0mg•L-1的汞離子外，還含有十種以上的其它金屬離子，且pH值為9.0。實(shí)驗(yàn)表明，與重組菌對(duì)只含汞離子的水溶液的處理結(jié)果比較，電解廢水中其它組份的存在意外地增大了重組菌富集汞離子的作用速率，但同時(shí)卻使細(xì)菌的最大汞富集量降低了約30%。

1.4　實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1　菌種保存　在500mL搖瓶中將重組菌接種到200mL含50mg·L-1氨芐霉素和30mg·L-1卡那霉素的LB培養(yǎng)基(Luria-Bertanimedium)中，在37℃下振蕩培養(yǎng)至OD600約為4(振蕩速率為170min-1)，在1.5mL無(wú)菌微型離心管中加入870μL細(xì)菌培液中和130μL88%的甘油，混合后用液氮速冷，然后保存在-80℃。

1.4.2　汞離子的生物富集　在1000mL搖瓶中裝入300mLLB培養(yǎng)液，加入50mg·L-1氨芐霉素和30mg·L-1卡那霉素，然后接入1mL細(xì)菌-甘油培養(yǎng)液，在37℃下振蕩(振蕩速率為170min-1)培養(yǎng)至過(guò)夜。取少量菌液接種到相同的LB培養(yǎng)液中，使初始菌體密度為OD600值01~0.3，37℃下振蕩培養(yǎng)至OD6000.5-0.7時(shí)添加誘導(dǎo)物異丙基β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)至終濃度為1.0mM。再次振蕩培養(yǎng)4h，4℃下離心收獲菌體待用。

菌體在使用前先用磷酸緩沖液洗滌，然后懸浮于含不同濃度汞離子的模擬電解廢水中在37℃下振蕩培養(yǎng)1h，離心收集菌體。為測(cè)量菌體內(nèi)所富集的汞離子含量，將收集的菌體干燥后用70%的高純度硝酸溶液消化過(guò)夜�？疾旄患俾蕰r(shí)，在不同的時(shí)間用0.2μm孔徑的醋酸纖維膜收集菌體，以使菌體和處理液盡快分離開(kāi)來(lái)。

由于重金屬離子易于被容器器壁吸附而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)誤差，實(shí)驗(yàn)中所用的所有導(dǎo)管和玻璃容器使用前都用20%的硝酸溶液浸泡過(guò)夜，然后用去離子水浸洗干凈。

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