摘要： 污染物對(duì)人體的潛在危害，引起人們的普遍關(guān)注。世界上已發(fā)展了百余種短期快速測(cè)試法，檢測(cè)污染物的遺傳毒性效應(yīng)。B．N．Ames等經(jīng)十余年努力，于1975年建立并不斷發(fā)展完善的沙門氏菌回復(fù)突變?cè)囼?yàn)（亦稱Ames試驗(yàn)）已被世界各國(guó)廣為采用。該法比較快速、簡(jiǎn)便、敏感、經(jīng)濟(jì)，且適用于測(cè)試混合物，反映多種污染物的綜合效應(yīng)。
    關(guān)鍵字：污染物 突變 檢測(cè)

一、目的和原理

鼠傷寒沙門氏菌（Salmonella typhimurium）的組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型（his－）菌株，在含微量組氨酸的培養(yǎng)基中，除極少數(shù)自發(fā)回復(fù)突變的細(xì)胞外，一般只能分裂幾次，形成在顯微鏡下才能見(jiàn)到的微菌落。受誘變劑作用后，大量細(xì)胞發(fā)生回復(fù)突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成肉眼可見(jiàn)的菌落。某些化學(xué)物質(zhì)需經(jīng)代謝活化才有致變作用，在測(cè)試系統(tǒng)中加入哺乳動(dòng)物微粒體酶①，可彌補(bǔ)體外試驗(yàn)缺乏代謝活化系統(tǒng)之不足。鑒于化學(xué)物質(zhì)的致突變作用與致癌作用之間密切相關(guān)，故此法現(xiàn)廣泛應(yīng)用于致癌物的篩選。

二、步驟和方法

Ames試驗(yàn)的常規(guī)方法有斑點(diǎn)試驗(yàn)和平板摻入試驗(yàn)。

1．菌株鑒定 用于測(cè)試的菌株，需經(jīng)基因型和生物學(xué)性狀鑒定，符合要求才能投入使用。

目前推薦使用的一套菌株是TA97、TA98、TA100和TA102。鑒定前先進(jìn)行增菌培養(yǎng)。為鑒定結(jié)果可*，需同時(shí)培養(yǎng)野生型TV菌株，作為測(cè)試菌基因型之對(duì)照。增菌培養(yǎng)用牛肉膏蛋白胨液體培養(yǎng)基，接種后于37℃，100r／min振蕩培養(yǎng)12h左右，細(xì)菌生長(zhǎng)相為對(duì)數(shù)期末，含菌數(shù)應(yīng)為1×109個(gè)／ml～2×109個(gè)／ml。

鑒定項(xiàng)目：

（1）脂多糖屏障丟失（rfa）用接種環(huán)或一端撓起的接種針以無(wú)菌操作術(shù)取各菌株的增菌培養(yǎng)液，在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上分別劃平行線，然后用滅菌尖頭鑷夾取滅菌濾紙條，浸濕結(jié)晶紫溶液，貼放在平板上與各接種平行線垂直相交。蓋好皿蓋后倒置于37t溫箱，培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。

（2）R因子 劃線接種，貼放濾紙條及培養(yǎng)等均同上，唯濾紙條浸濕的藥液不同，為氨芐青霉素鈉溶液。TA102除pKM101外，還有pAQ1，載有抗四環(huán)素的基因，故另用濾紙條浸濕四環(huán)素溶液后貼放于劃線接種的平板上。

（3）紫外線損傷修復(fù)缺陷（△uvrB）在營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板上按上述方法劃線接種后，一半接種線用黑玻璃遮蓋，另一半暴露于紫外光下8sec，然后蓋好皿蓋并用黑紙包裹平皿，防止可見(jiàn)光修復(fù)作用。培養(yǎng)同上。

（4）自發(fā)回變 預(yù)先制備底平板；向滅菌并在水浴內(nèi)保溫45℃的上層軟瓊脂中注入0.1ml菌液；混勻后傾于底平板上并鋪平。平皿倒置于37℃溫箱培養(yǎng)48h。

（5）回變特性——診斷性試驗(yàn) 上層軟瓊脂中除菌液外，還注入已知陽(yáng)性物之溶液，需活化系統(tǒng)者并加入S9mix，余同上。

組氨酸營(yíng)養(yǎng)缺陷型由自發(fā)回變即可知。

菌株鑒定正確結(jié)果見(jiàn)表5－3和圖5－1。

2．斑點(diǎn)試驗(yàn) 吸取測(cè)試菌增菌培養(yǎng)后的菌液0.1ml，注入融化并保溫45℃左右的上層軟瓊脂中，需S9活化的再加0.3ml－0.4mlS9mix，立即混勻，傾于底平板上，鋪平冷凝。用滅菌尖頭鑷夾滅菌圓濾紙片邊緣，紙片浸濕受試物溶液，或直接取固態(tài)受試物，貼放于上層培養(yǎng)基的表面。同時(shí)做溶劑對(duì)照和陽(yáng)性對(duì)照，分別貼放于平板上相應(yīng)位置。平皿倒置于37℃溫箱培養(yǎng)48h。在紙片外圍長(zhǎng)出密集菌落圈，為陽(yáng)性；菌落散布，密度與自發(fā)回變相似，為陰性（圖5－2）。

3．平板摻入試驗(yàn) 將一定量樣液和0.1ml測(cè)試菌液均加入上層軟瓊脂中，需代謝活化的再加0.3ml－0.4ml S9mix，混勻后迅速傾于底平板上鋪平冷凝。同時(shí)做陰性和陽(yáng)性對(duì)照，每種處理做3個(gè)平行。試樣通常設(shè)4個(gè)～5個(gè)劑量。選擇劑量范圍開(kāi)始應(yīng)大些，有陽(yáng)性或可疑陽(yáng)性結(jié)果時(shí)，再在較窄的劑量范圍內(nèi)確定劑量反應(yīng)關(guān)系。培養(yǎng)同上。同一劑量各皿回變菌落均數(shù)與各陰性對(duì)照皿自發(fā)回變菌落均數(shù)之比，為致變比（MR）。MR值≥2，且有劑量-反應(yīng)關(guān)系，背景正常，則判為致突變陽(yáng)性（圖5-3）。

三、應(yīng)用

1．斑點(diǎn)試驗(yàn)只局限于能在瓊脂上擴(kuò)散的化學(xué)物質(zhì)，大多數(shù)多環(huán)芳烴和難溶于水的化學(xué)物質(zhì)均不適宜用此法。此法敏感性較差，主要是一種定性試驗(yàn)，適用于快速篩選大量受試化合物。

2．平板摻入試驗(yàn)可定量測(cè)試樣品致突變性的強(qiáng)弱。此法較斑點(diǎn)試驗(yàn)敏感，獲陽(yáng)性結(jié)果所需的劑量較低。點(diǎn)試獲陽(yáng)性結(jié)果的濃度用于摻入試驗(yàn)（每皿0.1ml），往往出現(xiàn)抑（殺）菌作用。

3．致變作用遲緩或有抑菌作用的試樣，培養(yǎng)時(shí)間延長(zhǎng)至72h。

4．揮發(fā)性的液體和氣體試樣，可用干燥器內(nèi)試驗(yàn)法進(jìn)行測(cè)試。

5．目前，Ames試驗(yàn)作為檢測(cè)環(huán)境誘變劑的一組試驗(yàn)中的首選試驗(yàn)，廣泛應(yīng)用于致突變化學(xué)物的初篩。但是，與今天快信息、高效率的社會(huì)要求相比，該試驗(yàn)程序還嫌繁瑣，方法不夠簡(jiǎn)便，有待于創(chuàng)建新的更為快速靈敏、簡(jiǎn)單易行的環(huán)境誘變劑短期生物測(cè)試法。

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