液相色譜常見問題及處理辦法

問:用HPLC進行分析時保留時間有時發(fā)生漂移，有時發(fā)生快速變化，原因何在？如何解決？

答:關(guān)于漂移問題：

1． 溫度控制不好，解決方法是采用恒溫裝置，保持柱溫恒定

2． 流動相發(fā)生變化，解決辦法是防止流動相發(fā)生蒸發(fā)、反應等

3． 柱子未平衡好，需對柱子進行更長時間的平衡

關(guān)于快速變化問題

1． 流速發(fā)生變化，解決辦法是重新設定流速，使之保持穩(wěn)定

2． 泵中有氣泡，可通過排氣等操作將氣泡趕出。

3． 流動相不合適，解決辦法為改換流動相或使流動相在控制室內(nèi)進行適當混合

問: 色質(zhì)聯(lián)用中毛細柱的選擇應注意什么問題？

答: 1． 柱效要高

2． 熱穩(wěn)定性好

3． 化學惰性強

具體選擇應注意

1． 柱極性。根據(jù)分析樣品選擇不同極性的柱子進行分析

2． 柱子內(nèi)徑。內(nèi)徑大小決定柱容量

3． 液膜厚度。分析樣品溫度不一樣，對膜厚有不同要求，溫度高液膜要厚，溫度低液膜要薄

4． 柱長度。柱越長，柱效越高，分離效果越好，但也存在吸附問題，柱子過長，分析時間長，因此要根據(jù)樣品考慮柱子長度

5． 外涂層（柱體）的選擇。

6． 另外還有儀器型號、分析對象等因素

問:液相色譜中峰出現(xiàn)拖尾或出現(xiàn)雙峰的原因是什么？

答: 1． 篩板堵塞或柱失效，解決辦法是反向沖洗柱子，替換篩板或更換柱子。

2． 存在干擾峰，解決辦法為使用較長的柱子，改換流動相或更換選擇性好的柱子

問：從那些方面可以簡單判別毛細管柱子的熱穩(wěn)定性好壞？

答： 1． 分配容量（或容量因子）K，好的柱子在高溫運行后，分配容量K不應有明顯的下降，否則，說明柱子的熱穩(wěn)定性不好

2． 理論塔板數(shù)n，熱穩(wěn)定性好的柱子經(jīng)受高溫后，理論塔板數(shù)應基本保持恒定

3． 柱子的極性。熱穩(wěn)定性好的柱子，高溫前后極性變化不大，具體表現(xiàn)為保留指數(shù)I值沒有大的變化。

4． 噪聲。熱穩(wěn)定性好的柱子在高溫下使用后，噪聲不能增加。

5． 柱子的去活層，毛細管柱子涂固定液前內(nèi)部一般要用去活性試劑去活以增加惰性。質(zhì)量好的毛細管柱子高溫后，去活層不應該變
化，表現(xiàn)在對強極性樣品或酸堿性樣品的吸附性不能增加。

問：為什么進樣器內(nèi)的玻璃襯套會對色譜行為造成影響？

答：進樣器內(nèi)的玻璃襯套主要有下列作用：

1． 提供一個溫度均勻的汽化室，防止局部過熱。

2． 玻璃的惰性不不銹鋼好，減少了在汽化期間樣品分解的可能性。

3． 易于拆換清洗，以保持清潔的汽化室表面，一些痕量非揮發(fā)性組分會逐漸積累殘存于汽化室，高溫下會慢慢分解，使基流增加，噪聲增大，通過清洗玻璃襯套可以消除這種影響。

4． 可根據(jù)需要選擇管壁厚度及內(nèi)徑適宜的玻璃襯套，以改變汽化室的體積，而不用更換整個進樣加熱塊。
從以上幾個方面可以知道玻璃襯套對色譜行為造成影響的原因。

問：毛細管色譜分流進樣時，非線性分流的主要原因是什么？

答:1． 進樣器溫度太低，樣品汽化不完全，發(fā)生分級分流。

2． 進樣器溫度太高，某些組分可能發(fā)生熱分解，也有的樣品可能發(fā)生催化分解，或樣品部分地被吸附在進樣器內(nèi)表面上。

3． 在分流點以前樣品沒有混合均勻或混合不充分。

4． 系統(tǒng)的進樣墊、柱接頭等地方漏氣。

問：HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法

答: 1． 樣品量不足，解決辦法為增加樣品量

2． 樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學性質(zhì)改變流動相或柱子

3． 樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器

4． 檢測器衰減太多。調(diào)整衰減即可。

5． 檢測器時間常數(shù)太大。解決辦法為降低時間參數(shù)

6． 檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

7． 檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

8． 記錄儀測壓范圍不當。調(diào)整電壓范圍即可。

9． 流動相流量不合適。調(diào)整流速即可。

10． 檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

問：做HPLC分析時，柱壓不穩(wěn)定，原因何在？如何解決？

答：原因可能有：

1． 泵內(nèi)有空氣，解決的辦法是清除泵內(nèi)空氣，對溶劑進行脫氣處理；

2． 比例閥失效，更換比例閥即可；

3． 泵密封墊損壞，更換密封墊即可；

4． 溶劑中的氣泡，解決的辦法是對溶劑脫氣，必要時改變脫氣方法；

5． 系統(tǒng)檢漏，找出漏點，密封即可；

6． 梯度洗脫，這時壓力波動是正常的。

問：做PGS/MS分析時，如何防止焦油狀污染物進入毛細柱？

答：聚合物，尤其是一些含氮，硫及鹵素的高分子裂解時，常有焦油狀物質(zhì)產(chǎn)生。為防止這種焦油狀物質(zhì)進入毛細柱造成污染而使柱性能下降，可采用保護預柱，即在裂解器與毛細柱之間接一填充預柱，通過控制預柱溫度而使焦油狀物質(zhì)滯留在預柱內(nèi)，預柱可置于GC氣化室內(nèi)，這樣既容易控制溫度，又減少系統(tǒng)的死體積，當然，預柱填料需經(jīng)常更換。

問：我最近更換了另一種牌號的ODS柱，雖然分離情況仍可以，但保留時間不能重現(xiàn)，為什么？

答：這是因為被分析物可能具有形成氫鍵的能力。盡管過去幾年來，填料的制造技術(shù)有了極大的提高，但不同的廠商的ODS填料表面硅醇基的濃度不同。正是這些硅醇基可能與樣品發(fā)生相互作用。因此，同一被分析物中的各組分在不同牌號的ODS柱上的相對保留時間就可能不同。在流動相中加入少量競爭物，如三乙基胺（TEA），將會使硅醇基的成鍵能力飽和，從而能保證不同牌號柱子上的相對保留時間具有較好的重現(xiàn)性。

問：我購買的HPLC柱驗收測試時柱壓過高，請問為什么？

答：柱壓過高是HPLC柱用戶最常碰到的問題。其原因有多方面，而且常常并不是柱子本身的問題，您可按下面步驟檢查問題的起因。

1． 拆去保護預柱，看柱壓是否還高，否則是保護柱的問題，若柱壓仍高，再檢查；

2． 把色譜柱從儀器上取下，看壓力是否下降，否則是管路堵塞，需清洗，若壓力下降，再檢查；

3． 將柱子的進出口反過來接在儀器上，用10倍柱體積的流動相沖洗柱子，（此時不要連接檢測器，以防固體顆粒進入流動池）。這時，如果柱壓仍不下降，再檢查；

4． 更換柱子入口篩板，若柱壓下降，說明您的溶劑或樣品含有顆粒雜質(zhì)，正是這些雜質(zhì)將篩板堵塞引起壓力上升。若柱壓還高，請與廠商聯(lián)系。

一般情況下，在進樣器與保護柱之間接一個在線過濾器便可避免柱壓過高的問題，SGE提供的Rheodyne

7315型過濾器就是解決這一問題的最佳選擇。

問：高溫毛細柱的使用壽命一般為多長？

答：毛細柱壽命鋤決定于柱子本身的性能外，在很大程度上取決于使用情況，如使用溫度、樣品狀態(tài)，進樣量等，如果在其使用溫度范圍內(nèi)，樣品干凈，色譜柱不被污染的情況下，柱子壽命一般在2-3年之間。

問：如毛細管柱被污染，柱效和分辨率降低，有何方法使它恢復？是否可通過老化來解決？

答：根據(jù)柱污染程度可采取不同的方法來解決，如果污染不嚴重，污染物沸點不是太高，可通過老化來解決，但老化溫度不可超過柱子的最高使用溫度，且一般要較長時間（8-30）小時，如果污染較嚴重，或通過老化仍不能使柱性能恢復，那就必須采用溶劑清洗，通常是用5倍柱容積的溶劑（如正戊烷，二氯甲烷等）通過色譜柱。當然，清洗熔劑用的越多，對柱性能的損壞越大，清洗完后，在通載氣老化一定時間，如果柱性能恢復，便可繼續(xù)使用。
必須指出：只有交聯(lián)柱才能清洗，對于非交聯(lián)柱，清洗柱子會徹底失效，因為固定液被洗掉了，至于清洗用熔劑的選擇，可參考說明書。

問：BPX70毛細柱是否可用于GC/MS分析？

答：完全可以。BPX70為極性柱，使用溫度范圍寬（25-260C），程序升溫可達290C，流失低，適合于分析脂肪酸甲酯的的各種位置和幾何異構(gòu)體，藥物異構(gòu)體，碳水化合物等。因BPX70為交聯(lián)柱，故用于GC/MS很穩(wěn)定，污染后可清洗再生。